PCR eta mRNA itzulpena: ADN kopiak eta faseak
ADNren kopiak azkar sortzea (PCR)
Teknika honi esker ADN zatiak azkar azkar erreplikatzen dira, kantitate minimoetatik kantitate handietara lortuz denbora gutxian. Erreplikazio prozesu naturalean oinarritzen da, eta primer gisa jardungo duten oligonukleotidoak behar dira (sekuentzia ezagutu behar da). Erreplikazioa behin eta berriro errepikatzen da, ziklo bakoitzean ADN kantitatea bikoiztuz.
Prozesuaren gakoak
- ADN polimerasa: bakteria termofilo batetik lortutakoa, tenperatura altuetan egonkorra dena.
- Osagaiak: ADN-polimerasa, erreplikatu beharreko ADN zatiak, desoxierribonukleotido trifosfatoak eta primerak.
Fasen laburpena
- Beroketa: sistema berotu egiten da, ADN harizpiak bereizteko.
- Hoztean: primerak ADN harizpiekin lotzen dira eta ADN polimerasa nukleotidoak gehitzen hasten da, harizpi osagarria osatuz.
- Berriro: berotu, hoztu eta behar diren elementuak gehitu; prozesua errepikatzen da behar beste ADN kopia lortu arte.
Itzulpena: mRNAtik proteinaraino
mRNA baseen sekuentzian gordetako informazioa proteina baten aminoazidoen sekuentzia bilakatzen da. Molekula bitartekaria: tRNA, mRNA eta aminoazidoen arteko bitartekaria. tRNAk birustehosto formako egitura sekundarioa du eta 3' muturrean CCA hirukotea aminoazidoak lotzen ditu.
Itzulpenaren aurreko fasea
Aminoazidoak aktibatu egiten dira.
Itzulpenaren faseak
- Hasierako fasea: Prokariotoetan eta eukariotoetan antzekoa da. mRNA-n AUG kodoiak dagoenean hasten da. Erribosomen azpiunitate txikia mRNAra lotzen da, hasierako tRNA kokatu eta erribosoma osatzen da; bi finkapen-leku daude: P lekua (tRNA-Met) eta A lekua (aske dagoena).
-
Kate polipeptidikoen elongazioa: Katearen karboxilo-muturrari aminoazidoak gehitzen zaizkio. Prozesu ziklikoa da: ziklo bakoitzean aminoazido bat gehitzen da.
- 1. fasea: Hutsik dagoen A lekura antikodoi osagarria duen tRNA sartzen da.
- 2. fasea: P lekuko aminoazidoa A lekukoarekin lotzen da; P lekuko tRNA askatzen da. Lotura peptidikoen bidez lotzen dira aminoazidoak.
- 3. fasea: Erribosoma 3 nukleotidoz aurreratzen du; P lekuko tRNA kanporatzen da. Hurrengo zikloetan, P lekuan dagoen peptidoa A lekuko aminoazidoarekin lotuko da.